Lê Hữu Thôi * , Nguyễn Hà Giang , Trương Quỳnh Như Đặng Thị Hoàng Oanh

* Tác giả liên hệLê Hữu Thôi

Abstract

A PCR protocol for simultaneous detection of Edwardsiella ictaluri and Aeromonas hydrophila infection in kidney of striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) was optimized. The forward primer EiFd-1 and reverse primer EiRs were used to amplify a unique sequence of 16S RNA gene of E. ictaluri with a PCR product of 407 bp (Panangala et al., 2007). The forward primer AeroFd and reverse primer AeroRs were used to amplify aerolysin gene of A. hydrophila with a PCR product of 209 bp (Panangala et al., 2007). The lower detection limit was 100 pg for E. ictaluri and 1ng for A. hydrophila extracted DNA from striped catfish kidney. The diagnostic sensitivity and specificity of the PCR was evaluated with common bacterial isolates in aquaculture including Vibrio harveyi, V. alginolyticus, V. cholerae, A. sobria; A. carviae, Pseudomonas putida, Eschericchia coli, Bacillus subtilis. The PCR appears to have good application for rapid, sensitive, specificity and low cost for simultaneous detection of E. ictaluri and A. hydrophila in infected striped catfish.
Keywords: Aeromonas hydrophila, Pangasianodon hypophthalmus, mPCR, diagnosis

Tóm tắt

Qui trình PCR phát hiện đồng thời vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và Aeromonas hydrophila nhiễm trên thận cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) được thực hiện và chuẩn hóa. Mồi xuôi EiFd-1 và mồi ngược EiRs được sử dụng để khuếch đại đoạn đặc hiệu trên gen 16S RNA của E. ictaluri với sản phẩm PCR là 407 bp (Panangala et al., 2007). Mồi xuôi AeroFd và mồi ngược AeroRs được sử dụng để khuếch đại gen Aerolysin của A. hydrophila với sản phẩm PCR là 209 bp (Panangala et al., 2007). Độ nhạy của qui trình là 100 pg DNA chiết tách từ thận cá tra cho E. ictaluri và 1ng cho A. hydrophila. Tính đặc hiệu của qui trình được kiểm tra với vi khuẩn phổ biến trong thuỷ sản là Vibrio harveyi, V. alginolyticus, V. cholerae, A. sobria; A. carviae, Pseudomonas putida, Eschericchia coli, Bacillus subtilis. Qui trình có ứng dụng tốt để phát hiện nhanh, nhạy và đặc hiệu đồng thời E. ictaluri và A. hydrophila nhiễm trên cá tra.
Từ khóa: Edwardsiella ictaluri, Aeromonas hydrophila, Pangasianodon hypophthalmus, mPCR, chẩn đoán

Article Details

Tài liệu tham khảo

Bartie, K., D. T. H. Oanh, G. Huys, C. Dickson, M. Cnockaert, J. Swings, N. T. Phương and A. Teale, 2006. Ứng dụng REP-PCR và PFGE để định týp vi khuẩn kháng chloramphenicol phân lập tại các trại nuôi thủy sản ở đồng bằng sông Cửu Long. Tạp chí công nghệ sinh học. 4 (1): 31-40.

Đặng Thị Hoàng Oanh và Đặng Thụy Mai Thy. 2009. Nghiên cứu ứng dụng qui trình PCR chẩn đoán vi khuẩn Edwardsiella ictaluri trên thận cá tra (Pangasianodon hypophthalmus). Kỷ yếu hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc.

Đặng Thị Hoàng Oanh và Nguyễn Trúc Phương. 2009. Phát hiện vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây bệnh mủ gan trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) bằng phương pháp PCR. Tạp chí khoa học. Đại học Cần Thơ.

Nguyễn Hà Giang, Trương Quỳnh Như, Lê Hữu Thôi và Đặng Thị Hoàng Oanh. 2009. Nghiên cứu ứng dụng qui trình PCR chẩn đoán vi khuẩn Aeromonas hydrophila trên thận cá tra (Pangasianodon hypophthalmus). Hội nghị nuôi nuôi trồng thủy sản toàn quốc. Đại học Nông lâm, Thành phố Hồ Chí Minh.

Panangala V. S., Craig A. Shoemaker, Vicky L. Van Santen, Kevin Dybvig, Phillip H. Klesius, 2007. Multiplex-PCR for stimultaneous detection of 3 bacteria fish pathogen, Flavobacterium columnare, Edwardsiella ictaluri and Aeromonas hydrophila. Disease of aquatic organisms 74: 199-208.

Taggart, J. B., R . A. Hynes, P. A. Podohl and A. Ferguson, 1992. A simplified protocol for routine total DNA isolate from salmonid fishs. Journal of fish Biology 40: 963-965.