Tối ưu các điều kiện sinh enzyme protease ngoại bào của vi khuẩn Streptomyces DH3.4
Abstract
This study was conducted under in vitro conditions to assess the effect of culture conditions on the protease production of Streptomyces DH3.4. Experiments were conducted in various pH levels (4, 5, 6, 7, 8 9) and different concentrations of NaCl (0; 0.5; 1; 1,5; 2; 2.5; 3 and 3.5%). The incubation time in the experiment was observed at intervals of 24, 48, 72, 96, 120, 144 and 168 hours. The sources of carbon used in the experiment were glycerol, D-glucose, sucrose, D-maltose, D-xylose, soluble starch with a concentration of 1%. Organic nitrogen sources were chosen such as casein, malt extract, peptone, tryptone, soybean meal, and yeast extract with a concentration of 0.5%. The sources of inorganic nitrogen including KNO3, (NH4NO3), (NH4)2SO4 and NH4Cl were designed with a concentration of 0.1%. Each experiment was run in triplicates. The results showed that the maximum protease production from Streptomyces strain DH3.4 was found under culture conditions adjusted to pH7.0, 1.5% NaCl and 144 hours of incubation. Starch performed the sole source of carbon, whereas malt extract and (NH4)2SO4 were the superior organic and inorganic substrates, respectively.
Tóm tắt
Nghiên cứu được thực hiện trong điều kiện in vitro nhằm đánh giá sự ảnh hưởng của các yếu tố môi trường lên hoạt tính enzyme protease của vi khuẩn Streptomyces DH3.4. Thí nghiệm thực hiện ở các môi trường pH khác nhau 4; 5; 6; 7; 8 và 9, nồng độ NaCl 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3 và 3,5%. Thời gian quan sát trong thí nghiệm là 24, 48, 72, 96, 120, 144 và 168 giờ. Nguồn carbohydrate sử dụng trong thí nghiệm là glycerol, D-glucose, sucrose, D-maltose, D-xylose, soluble starch với nồng độ 1%. Nguồn nitrogen hữu cơ sử dụng là casein, malt extract, peptone, tryptone, bã đậu nành, yeast extract với nồng độ 0,5%. Nguồn nitơ vô cơ bao bồm KNO3, NH4NO3, (NH4)2SO4 và NH4Cl được bố trí với nồng độ 0,1%. Thí nghiệm đươc bố trí với 3 lần lặp lại. Kết quả cho thấy khả năng sinh hoạt tính protease cao nhất của chủng Streptomyces DH3.4 được ghi nhận ở điều kiện nuôi cấy pH 7,0; 1,5% NaCl và thời gian nuôi cấy là 144 giờ. Tinh bột là nguồn carbon tốt nhất, trong khi malt extract và (NH4)2SO4 lần lượt là các cơ chất đạm hữu cơ và vô cơ tối ưu.
Article Details
Tài liệu tham khảo
Akhtar, N., Mahmud, A.S.M., Khan, M.S., Taznin, T., Haque, M.E., Sultana S. & Sultana, S. (2013). Effects of cultural conditions on the production of extracellular protease by Streptomyces albolongus and Streptomyces aburaviensis. Enzyme Engineering, 2(2), 1-5.
APHA. (2017). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (23rd ed.), American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation, Denver.
Al-Dhabi, N. A., Esmail, G. A., Ghilan, A. K. M., Arasu, M. V., Duraipandiyan, V., & Ponmurugan, K. (2020a). Characterization and fermentation optimization of novel thermo stable alkaline protease from Streptomyces sp. Al-Dhabi-82 from the Saudi Arabian environment for eco-friendly and industrial applications. Journal of King Saud University-Science, 32(1), 1258-1264.
Al-Dhabi, N. A., Esmail, G. A., Ghilan, A. K. M., & Arasu, M. V. (2020b). Isolation and screening of Streptomyces sp. Al-Dhabi-49 from the environment of Saudi Arabia with concomitant production of lipase and protease in submerged fermentation. Saudi journal of biological sciences, 27(1), 474-479.
Đỗ Thị Bích Thủy. (2012). Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến sự thu nhận chế phẩm protease ngoại bào của Bacillus amyloliquefacien N1. Tạp chí khoa học trường Đại học Huế, 71(2), 279-290.
Fernandes, S., Kerkar, S., Leitao, J. & Mishra, A. (2019). Probiotic role of salt pan Bacteria in enhancing the growth of whiteleg shrimp, Litopenaeus vannamei. Probiotics and antimicrobial proteins, 11(4), 1309-1323.
Haritha, R., SivaKumar, K., Swathi, A., Jagan Mohan, Y.S.Y.V. & Ramana, T. (2012). Characterization of Marine Streptomyces carpaticus and optimization of conditions for production of extracellular protease. Microbiology Journal, 2(1), 23-35.
Huynh, T.G., Nguyen, T.P., Tran, T.T.H., Chi, C.C., Cheng, A.A. & Liu, C.H. (2018). Effects of synbiotic containing Lactobacillus plantarum 7-40 and galacto-oligosaccharide on the growth performance of white shrimp, Litopenaeus vannamei. Aquaculture Research. 46, 2416-2428.
Jayasree, D., T.D.S. Kumari, P.B.K. Kishor, M.V. Lakshmi & M.L. Narasu. (2009). Optimization of production protocol of alkaline protease by Streptomyces pulvereceus. Int. JRI Sci. and Technology, 1(2), 79-82.
Lê Thị Hải Yến và Nguyễn Đức Hiền. (2016). Khảo sát đặc tính probiotic các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập tại các tỉnh đồng bằng sông Cửu Long. Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Số chuyên đề: Nông nghiệp(Tập 2), 26-32.
Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., & Randall, R.J. (1951). Protein measurement with the folin phenol reagent. Journal of Biological Chemistry, 193(1), 265-275.
Nayera A.M. Abdelwahed, Enas N. Danial, Noura El-Ahmady El-Naggar & Asem A. Mohamed. (2014). Optimization of alkaline protease production by Sstreptomyces ambofaciens in free and immobilized form. American Journal of Biochemistry and Biotechnology, 10(1), 1-13.
Nomoto Masao, Narahashi Yoshiko & Murakami Mitsuru. (1960). A proteolytic enzyme of Streptomyces griseus. Hydrolysis of protein by Streptomyces griseus protease. The Journal of Biochemistry, 48(4), 593-602.
Phạm Văn Nhuần, 2020. Phân lập và tuyển chọn một số dòng xạ khuẩn ứng dụng trong nuôi trồng thủy sản. Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Cần Thơ.
Sengupta, S., & Paul, A. K. (1992). Nutritional conditions for the germination of streptomyces galbus 5ME-13 spores. Acta Biotechnologica, 12(3), 223-228.
Shatoury, S. A., Ameen, F., Moussa, H., Abdul Wahid, O., Dewedar, A. & Al Nadhari, S. (2020). Biocontrol of chocolate spot disease (Botrytis cinerea) in faba bean using endophytic actinomycetes Streptomyces: a field study to compare application techniques. Peerj – Life & Environtment, 8(3), 2-14.
van Veen, J.A., & Paul, E.A. (1979). Conversion of biovolume measurements of soil organisms, grown under various moisture tensions, to biomass and their nutrient content. Applied and Environmental Microbiology