PHÁT HIỆN NHANH SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA HIỆN DIỆN TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI (MULTIPLEX PCR)

Trần Thị Xuân Mai * , Trần Thị Hoàng Yến , Nguyễn Văn Bé và Võ Thị Thanh Phương

* Tác giả liên hệ (ttxmai@ctu.edu.vn)

Article Sidebar

Full Text: PDF

Ngày nhận bài: 20-04-2021
Ngày duyệt đăng: 03-06-2022
Ngày xuất bản: 01-05-2011
Title:
Lượt xem
367
Downloads
217
Trích dẫn
Mai, T. T. X., Yến, T. T. H., Bé, N. V., & Phương, V. T. T. (2011). PHÁT HIỆN NHANH SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA HIỆN DIỆN TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI (MULTIPLEX PCR). Tạp chí Khoa học Đại học cần Thơ, (20b), 198-208. Truy vấn từ https://ctujsvn.ctu.edu.vn/index.php/ctujsvn/article/view/1140
Số báo
Số. 20b (2011)
Chuyên mục
Công nghệ

Abstract

The aim of this study was to develop a polymerase chain reaction protocol using two specific primer sets for the detection of Salmonella enteritica in food products. The results showed that the invA primer set was specific for Salmonella spp. and the spvC primer set was specific for Salmonella enteritica including Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium. A multiplex PCR using two sets of primers to amplify the tagged genes of invA and spvC was successfully developed. A total of 260 specimens of food products collected from different markets in Cantho city were examined for Salmonella, the results showed that 20% of fermented pork roll samples, 47.5% of pork samples, 30% of beef samples, 46.7% of chicken meat samples, 40% of egg shell samples, 10% of egg samples (egg white and egg yolk), 0% of fermented crab samples, 40% of red ark shell samples, and 20% of pork skin products were contaminated with Salmonella spp. In addition, 2.5% of pork samples, 2.5% of beef samples, 1.6% of chicken meat samples, 10% of egg shell samples and 5% of bloood cockle samples were contaminated with Salmonella  enteritica.
Keywords: spvC gene, multiplex-PCR, Salmonella enteritica

Tóm tắt

Mục tiêu của nghiên cứu này nhằm phát triển qui trình PCR sử dụng hai cặp mồi chuyên biệt để phát hiện Salmonella enteritica trong thực phẩm. Kết quả nghiên cứu cho thấy cặp mồi invA đặc hiệu cho Salmonella spp., và cặp mồi spvC đặc hiệu cho Salmonella enteritica bao gồm Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis. Kỹ thuật PCR đa mồi để khuếch đại các gen mục tiêu invA và spvC đã được phát triển thành công. Trong tổng số 260 mẫu thực phẩm được thu thập từ các chợ khác nhau trong địa bàn thành phố Cần Thơ để kiểm tra về sự hiện diện của Salmonella. Kết quả cho thấy tỉ lệ mẫu thực phẩm bị nhiễm Salmonella spp. là nem chua (20%), thịt heo (47,5%), thịt bò (30%), thịt gà (46,7%), trứng gà (lòng trắng và lòng đỏ) (10%), vỏ trứng gà (40%), chả lụa (10%), ba khía (0%), sò huyết (40%), bì heo (20%). Trong đó, 2,5% ở thịt heo, 2,5% ở thịt bò, 1,6% ở thịt gà, 10% ở vỏ trứng gà và 5% ở sò huyết phát hiện nhiễm Salmonella enteritica.
Từ khóa: gen invA, gen spvC, PCR đa thành phần, Salmonella enteritica

Article Details

Tài liệu tham khảo

Baay MFD and Huis in't Veld JHJ (1993) Alternative antigens reduce cross-reactions in an ELISA for the detection of Salmonella enteritidis in poultry. J Appl Bacteriol 774:243-247.

Cédric LB, Hanh TT, Thanh NT, Thuong DD and Thuy NC (2006) Prevalence and epidemiology of Salmonella enterica subsp. enterica in small pig slaughtering units in Hanoi, Vietnam. Ann. N. Y. Acad. Sci 1081, pp. 269-272

Chiu CH and Ou JT (1996) Rapid identification of Salmonella serovars in feces by specific detection of virulence genes, invA and spvC, by an enrichment broth culture-multiplex PCR combination assay. J Clin Microbiol 34, 2619-2622.

Galan JE, Ginocchio C and Costeas P (1992) Molecular and functional characterization of the salmonella invasion gene inva: homology of inva to members of a new protein family. j bacteriol 174(13): 4338-4349

Galan JE and Curtiss R (1991) Distribution of the invA, -B, -C, and -D genes of Salmonella typhimurium among other Salmonella serovars: invA mutants of Salmonella typhi are deficient for entry into mammalian cells. Infect Immun. 59(9), 2901-2908

Gentry-Weeks C, Hutcheson HJ, Kim LM, Bolte D, Traub- Dargatz J, Morley P, Powers B and . Jessen M (2002) Identification of two phylogenetically related organisms from feces by PCR for detection of Salmonella spp. J Clin Microbiol 40, 1487–1492.

Gulig PA, Danbara H, Guiney DG, Lax AJ, Norel F, and Rhen M (1993) Molecular analysis of spv virulence genes of the Salmonella virulence plasmids. Mol. Microbiol 7:825–830

Hao VTT, Moutafis G, Istivan T, Thuoc TL and Coloe PJ (2007) Detection of Salmonella spp. in retail raw food samples from Vietnam and characterization of their antibiotic resistance. Applied and Environmental Microbiology 73 (21), pp. 6885-6890.

Herikstad HY and Tauxe MRV (2002) Salmonella Surveillance: a Global Survey of Public Health Serotyping. Epidemiol Infection 129, 1–8.

Huong LQ, Fries R, Padungtod P, Hanh TT, Kyule M, Baumann MPO and Zessin KH (2006) Prevalence of Salmonella in retail chicken meat in Hanoi, Vietnam. Annals of the NewYork Acedamy of Sciences 1081, pp.257-261

International Organization for Standardization (2003) Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella (ISO 6579:2003), Geneva.

Kent PT, Thomason BM, Morris GK (1981) Salmonellae in Foods and Feeds. p. 29,USA: Department of Health and Human Services, Atlanta.

Kumar S, Balakrishna K and Batra HV (2006) Detection of Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) by selective amplification of invA, viaB, fliC-d and prt genes by polymerase chain reaction in multiplex format. Lett Appl Microbiol 42:149-54.

Libby SJ, Lesnick M, Hasegawa P, Weidenhammer E and Guiney DG (2000) The Salmonella virulence plasmid spv genes are required for cytopathology in human monocyte-derived macrophages. Cellular Microbiol 2: 49-58.

Lin CL, Chiu CH, Chu C, Huang YC, Lin TY and Ou JT (2007) A multiplex chain reaction method for rapid identification of Citrobacter freundii and Salmonella species, including Salmonella Typhi. J. Microbiol. Immunol. Infect. 40: 222-226.

Mazurkiewicz P, Thomas J, Thompson JA, Liu M, Arbibe L, Sansonetti P and Holden DW (2008) SpvC is a Salmonella effector with phosphothreonine lyase activity on host mitogen-activated protein kinases. Mol Microbiol. 67:1371-1383

Nguyễn Ngọc Tuân, Lê Hữu Ngọc và Huỳnh văn Điểm (2006) Tình hình nhiễm Salmonella trong phân và thịt heo, bò tại một số tỉnh miền Tây Nam bộ. Tạp chí KHKT Nông Lâm nghiệp. 1

Nguyễn Thu Tâm (2008) Tình hình nhiễm vi khuẩn S. Enteritidis và S. Typhimurium trên thịt và trứng gà ở một số cơ sở phân phối thực phẩm ở Thành phố Cần Thơ. Đề tài nghiên cứu khoa học cấp trường.

Nguyễn Tiến Dũng và Trần Linh Thước (2003) Khảo sát sự hiện diện của plasmid spv ở các Salmonella phân lập từ nước và thủy sản. Tạp chí di truyền học và Ứng dụng. Số 2.

Matsui H, Bacot CM, Garlington WA, Doyle TJ, Roberts S, Gulig PA (2001) Virulence plasmid-borne spvB and spvC genes can replace the 90-kilobase plasmid in conferring virulence to Salmonella enterica serovar Typhimurium in subcutaneously inoculated mice. J Bacteriol. 183:4652–4658.

Nowak BT, Müffling V, Chaunchom S and Hartung J (2007) Salmonella contamination in pigs at slaughter and on the farm: A field study using an antibody ELISA test and a PCR technique. International Journal of Food Microbiology 115, pp. 259–267

Oliveira SD, Rodenbusch CR, Michael G, Cardoso MIR, Canal CW and Brandelli A (2003) Detection of virulence genes in Salmonella Enteritidis isolated from different sources. Braz. J. Microbiol. 34, 123-124.

Padungtod PJ and Kaneene B (2006) Salmonella in food animals and humans in northern Thailand. Int. J. Food Microbiol. 108: 346-354.

Phẩm Minh Thu, Phan Thu Dòng, Trương Xuân Liên (2006). Hai mươi bốn giờ phát hiện Salmonella spp. trong thực phẩm bằng phương pháp PCR. Liên hiệp các hội khoa học & kỹ thuật Việt Nam. Trung tâm khoa học & công nghệ thực phẩm. http://vietnamfood.com.vn/news (12/6/2010)

Phan TT, Khai LT, Ogasawara N, Tam NT, Okatani AT, Akiba M and Hayashidani H (2005) Contamination of Salmonella in retail meats and shrimps in the Mekong Delta, Vietnam. J Food Prot., 68 (5), pp.1077-80.

Piskus J, Franciosini MP, Proietti PC, Reich F, Kazeniauskas E, Butrimaite-Ambrozeviciene C, Mauricas M and Bolder N (2008) Preliminary investigations on Salmonella spp. Incidence in Meat Chicken. International Journal of Poultry Science 7 (8), pp. 813-817.

Rahn K, De Grandis SA, Clarke RC, McEwen SA, Galan JE, Ginocchio C, Curtiss R and Gyles CL (1992) Amplification of an invA gene sequence of Salmonella Typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of detection of Salmonella. Mol Cell Probes 6(4), 271-9

Shoba CS, Banhart HM, Lee MD and Dreesen DW (1996) Virulence determinants invA and spvC in Salmonella isolated from poultry products wastewater and Human sources. Applied and Emvironmental Mcrobiology 2, pp. 3768-3771.

Suzuki S, Komase K, Matsui H, Abe A, Kawahara K, Tamura Y, Kijima M, Danbara H, Nakamura M, Sato S (1994) Virulence region of plasmid pNL2001 of Salmonella enteritidis Microbiology 140:1307-1318.

Tan WL and Shelef A (1999) Automated detection of Salmonella spp. in foods. J Microbiol Methods 37, 87-91.References and further reading may be available for this article. To view references and further reading you must purchase this article.

TCVN: 7926-2008 và TCVN 6040: 2007

Vo ATT, Duijkeren EV, Fluit AC, Heck MEOC, Verbruggen A, Maas HME and Gaastra W (2006) Distribution of Salmonella enterica Serovars from humans, livestock and meat in Vietnam and the Dominance of Salmonella Typhimurium Phage Type 90. Vet Microbiol 113: 153–158.

Wilson MAR, Rimler B and Hofman LJ (1992) Comparison of DNA fingerprints and somatic serotypes of serogroup B and E Pasteurella multocida. J. clin. Microbiol 30,1518-1524.

Zahraei Salehi T, Mahzounieh M and Saeedzadeh A (2005) Detection of invA gene in isolated Salmonella from broilers by PCR method. Int J Poult Sci 4(8), 557–559