Tạo dòng và biểu hiện protein dung hợp LTB-STB của Enterotoxigenic Escherichia coli gây tiêu chảy trên heo con

Abstract

Diarrhea caused by Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) causes weight loss, slow growth or death, leading to economic losses. Currently, there is no effective vaccine to prevent ETEC. Toxoid vaccines are based on the most common ETEC enterotoxin - STb. which is poor immunogenicity, To solve the problem, STb was fused with B subunit of enterotoxin LT to enhance the immunogenicity of STb. and increase the spectrum of ETEC vaccine. In this study, gene estB (encoding for STb) and plasmid pET28a-eltB were treated simultaneously with HindIII and XhoI, after that, were ligated by T4 ligase to form pET28a-eltB-estB then were confirm by DNA sequencing. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3) strain and evaluated the protein expression by, SDS - PAGE and Western blot with 6xHis probe. In result, LTB-STb was successfully cloned and expressed in inclusion bodies, create a source for further immunogenicity experiments.

Tóm tắt

Bệnh tiêu chảy do Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) làm heo giảm trọng lượng, chậm lớn hoặc chết, gây nhiều thiệt hại kinh tế nhưng vẫn chưa có vaccine phòng ngừa. Vaccine giải độc tố phổ biến nhất dựa trên tiểu phần B của độc tố bền nhiệt (STb) nhưng lại sinh miễn dịch kém. Để giải quyết vấn đề, STb được dung hợp với tiểu phần B độc tố nhạy nhiệt (LTb) để tăng tính sinh miễn dịch cho STb và mở rộng phổ kháng. Trong nghiên cứu này, gene estB mã hóa STb và plasmid pET28a-eltB được xử lý với hai enzyme HindIII và XhoI, sau đó nối với nhau bằng T4 ligase để tạo plasmid pET28a-eltB-estB. Plasmid tái tổ hợp sau khi xác nhận bằng giải trình tự được biến nạp vào chủng E. coli BL21 (DE3) và được kiểm tra sự biểu hiện protein bằng phương pháp SDS ‑ PAGE và Western blot với kháng thể anti-6xHis. Kết quả, gene mã hóa độc tố đường ruột LTB-STb đã được tạo dòng và biểu hiện thành công ở dạng thể vùi, làm nguyên liệu cho các thử nghiệm tính sinh miễn dịch của protein dung hợp này.