Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch Protein A-L2 bằng silica
,
và
*
Article Sidebar
Full Text: 
PDF
Abstract
Protein immobilized silica (SiO2) particles are promising materials in the fields of biomedicine or biosensors. Through previous studies, it was found that the Escherichia coli ribosomal protein L2 strongly binds to silica particles. In addition, protein A which is derived from Staphylococcus aureus bacteria, is a highly stable surface receptor. The interaction between protein A and antibodies is considered one of the classical protein-protein interactions. This study created a fusion protein A subunit with recombinant L2 protein by constructing the vector pET22b-proAx1-L2. The Protein A-L2 was expressed in E. coli BL21(DE3) system and analyzed using SDS-PAGE. Based on the specific binding to silica particles, Protein A-L2 was purified by unmodified bare silica particles and a high concentration of MgCl2 solution. With the purification method by silica beads, high efficiencies were achieved, such as rapid purification, cost savings, and comparative purity.
Tóm tắt
Các hạt silica (SiO2) được cố định protein là vật liệu đầy triển vọng trong các lĩnh vực y sinh hay cảm biến sinh học. Những nghiên cứu trước cho thấy protein ribosome L2 của vi khuẩn Escherichia coli liên kết mạnh với các hạt silica. Ngoài ra, protein A là thụ thể bề mặt có tính ổn định cao, có nguồn gốc từ vi khuẩn Staphylococcus aureus, sự liên kết giữa protein A và kháng thể được xem là một trong những tương tác protein-protein kinh điển được nghiên cứu nhiều nhất hiện nay. Nghiên cứu này được tiến hành nhằm tạo tiểu phần protein A dung hợp với protein L2 tái tổ hợp bằng cách cấu trúc vector pET22b-proAx1-L2. Protein được biểu hiện thông qua hệ thống E. coli BL21(DE3) và được kiểm tra bằng SDS-PAGE. Dựa vào sự liên kết đặc hiệu với hạt silica, Protein A-L2 được tinh sạch bằng các hạt silica trần không biến tính và sử dụng dung dịch MgCl2 nồng độ cao để dung ly protein mục tiêu. Phương pháp tinh sạch bằng hạt silica sẽ mang lại hiệu quả như tinh sạch nhanh chóng, tiết kiệm chi phí và độ tinh...
Article Details
Tài liệu tham khảo
Cha, T., Guo, A., & Zhu, X. Y. J. P. (2005). Enzymatic activity on a chip: the critical role of protein orientation. Proteomics, 5(2), 416-419.
https://doi.org/10.1002/pmic.200400948
Fuchs, S. M., & Raines, R. T. J. P. S. (2005). Polyarginine as a multifunctional fusion tag. Protein science, 14(6), 1538-1544.
https://doi.org/10.1110/ps.051393805
Graille, M., Stura, E. A., Corper, A. L., Sutton, B. J., Taussig, M. J., Charbonnier, J.-B., & Silverman, G. J. J. P. o. t. N. A. o. S. (2000). Crystal structure of a Staphylococcus aureus protein A domain complexed with the Fab fragment of a human IgM antibody: structural basis for recognition of B-cell receptors and superantigen activity. Proceedings of the National Academy of Sciences, 97(10), 5399-5404.
Ikeda, T., Ninomiya, K.-i., Hirota, R., Kuroda, A. J. P. e., & purification. (2010). Single-step affinity purification of recombinant proteins using the silica-binding Si-tag as a fusion partner. Protein expression and purification, 71(1), 91-95.
https://doi.org/10.1016/j.pep.2009.12.009
Mai, Q.-G., Vo-Nguyen, H.-V., Tran, T. L., & Tran-Van, H. J. J. o. A. B. R. (2022). All-in-One Molecular Cloning as a New Gene Manipulation Method. Journal of Applied Biotechnology Reports, 9(1), 511-515.
https://doi.org/10.1073/pnas.97.10.5399
Manat, Y., Shustov, A., Evtehova, E., & Eskendirova, S. (2016). Expression, purification and immunochemical characterization of recombinant OMP28 protein of Brucella species. Open Veterinary Journal, 6(2), 71-77.
https://doi.org/10.4314/ovj.v6i2.1
Nguyen, T.-T., Vo-Nguyen, H.-V., & Tran-Van, H. (2021). Prokaryotic expression of chimeric GFP-hFc protein as a potential immune-based tool. Molecular Biology Research Communications, 10(3), 105.
Rahman, W. N., Corde, S., Yagi, N., Abdul Aziz, S. A., Annabell, N., & Geso, M. (2014). Optimal energy for cell radiosensitivity enhancement by gold nanoparticles using synchrotron-based monoenergetic photon beams. Int J Nanomedicine, 9, 2459-2467. doi:10.2147/IJN.S59471
https://doi.org/10.2147/IJN.S59471
Rosano, G. L., & Ceccarelli, E. A. J. F. i. m. (2014). Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges. Frontiers in Microbiology, 5, 172.
https://doi.org/10.3389/fmicb.2014.00172
Taniguchi, K., Nomura, K., Hata, Y., Nishimura, T., Asami, Y., Kuroda, A. J. B., & Bioengineering. (2007). The Si‐tag for immobilizing proteins on a silica surface. Biotechnology and Bioengineering, 96(6), 1023-1029. https://doi.org/10.1002/bit.21208