Tạo dòng, biểu hiện kháng nguyên F18 dung hợp peptide định hướng tế bào M

Abstract

F18 fimbria plays an important role in Enterotoxigeneic Escherichia coli (ETEC) colonization and enterotoxin secretion on gut mucosa that causes post-weaning diarrhea (PWD). The vaccine offers a powerful, cost-effective, and possible approach to protect pigs against ETEC. Recently, many studies have focused on oral vaccine, which can induce mucosal immunity by targeting M cell. A body of evidence shows that protein Hsp60 is able to interact with PrPC on M cell surface. Based on Hsp60 structure model, a peptide named PEP was predicted to interact with receptor PrPC by bioinformatic calculations. To construct pET22b-pep-f18 vector, gfp gene was swapped for f18 gene from pET22b‑pep‑gfp vector. After digestion by XhoI and BamHI, f18 gene and pET22b‑pep‑gfp vector were ligated by T4 DNA Ligase. The pET22b‑pep‑f18 vector was transformed into E. coli BL21(DE3) strain, and induced by 0.5 mM IPTG. The expression of PEP-GFP protein was confirmed by SDS-PAGE Coomassie Blue staining, and Western blot probed with anti‑6xHis antibody. Finally, PEP‑F18 protein was purified by using immobilized‑metal affinity chromatography (IMAC). The results showed that the pET22b-pep-f18 vector was successfully cloned. PEP‑F18 protein was collected, and purified with high purity. This is an essential material for later immunological evaluation.

Tóm tắt

Tiêm mao F18 đóng vai trò quan trọng giúp Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) bám vào ruột và tiết độc tố gây bệnh tiêu chảy heo con sau cai sữa (post-weaning diarrhea, PWD). Vaccine là một cách thức hữu hiệu, kinh tế và khả thi giúp phòng chống ETEC trên heo. Việc phát triển vaccine uống, tạo miễn dịch niêm mạc thông qua nhắm trúng đích tế bào M đang được quan tâm. Nhiều nghiên cứu cho thấy Hsp60 có khả năng tương tác với PrPC trên bề mặt tế bào M. Dựa trên cấu trúc của Hsp60 và tin sinh học, peptide PEP được dự đoán có khả năng tương tác với thụ thể PrPC. Vector pET22b-pep-f18 được cấu trúc bằng cách thế gene gfp trong vector pET22b‑pep‑gfp bằng gene f18. Sau khi xử lí với cặp enzyme cắt hạn chế XhoI và BamHI, gene f18 và vector pET22b‑pep‑gfp được nối với nhau bằng T4 DNA Ligase. Vector pET22b‑pep-f18 được hóa biến nạp vào chủng vi khuẩn E. coli BL21(DE3), cảm ứng biểu hiện với IPTG 0,5 mM. Sự biểu hiện của protein PEP‑GFP được kiểm tra bằng điện di SDS-PAGE, nhuộm Coomassie Blue và Western blot với kháng thể kháng 6xHis. Cuối cùng, protein PEP‑F18 được tinh sạch bằng sắc ký ái lực ion kim loại (IMAC). Kết quả cho thấy vector pET22b‑pep-f18 đã được tạo thành công. Protein PEP‑F18 được thu nhận, tinh sạch với độ tinh sạch cao...