Huỳnh Thị Xuân Mai * , Trần Văn Hiếu , Nguyễn Đặng Thanh Hảo Huỳnh Kiến Quang

* Tác giả liên hệ (vongxe@gmail.com)

Abstract

Diarrhea caused by Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) causes weight loss, slow growth or death, leading to economic losses. Currently, there is no effective vaccine to prevent ETEC. Toxoid vaccines are based on the most common ETEC enterotoxin - STb. which is poor immunogenicity, To solve the problem, STb was fused with B subunit of enterotoxin LT to enhance the immunogenicity of STb. and increase the spectrum of ETEC vaccine. In this study, gene estB (encoding for STb) and plasmid pET28a-eltB were treated simultaneously with HindIII and XhoI, after that, were ligated by T4 ligase to form pET28a-eltB-estB then were confirm by DNA sequencing. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3) strain and evaluated the protein expression by, SDS - PAGE and Western blot with 6xHis probe. In result, LTB-STb was successfully cloned and expressed in inclusion bodies, create a source for further immunogenicity experiments.
Keywords: Diarrhea, ETEC, neonatal pig, recombinant vaccine, ST enterotoxin

Tóm tắt

Bệnh tiêu chảy do Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) làm heo giảm trọng lượng, chậm lớn hoặc chết, gây nhiều thiệt hại kinh tế nhưng vẫn chưa có vaccine phòng ngừa. Vaccine giải độc tố phổ biến nhất dựa trên tiểu phần B của độc tố bền nhiệt (STb) nhưng lại sinh miễn dịch kém. Để giải quyết vấn đề, STb được dung hợp với tiểu phần B độc tố nhạy nhiệt (LTb) để tăng tính sinh miễn dịch cho STb và mở rộng phổ kháng. Trong nghiên cứu này, gene estB mã hóa STb và plasmid pET28a-eltB được xử lý với hai enzyme HindIII và XhoI, sau đó nối với nhau bằng T4 ligase để tạo plasmid pET28a-eltB-estB. Plasmid tái tổ hợp sau khi xác nhận bằng giải trình tự được biến nạp vào chủng E. coli BL21 (DE3) và được kiểm tra sự biểu hiện protein bằng phương pháp SDS ‑ PAGE và Western blot với kháng thể anti-6xHis. Kết quả, gene mã hóa độc tố đường ruột LTB-STb đã được tạo dòng và biểu hiện thành công ở dạng thể vùi, làm nguyên liệu cho các thử nghiệm tính sinh miễn dịch của protein dung hợp này.
Từ khóa: Độc tố ST, ETEC, heo con, tiêu chảy, vaccine tái tổ hợp

Article Details

Tài liệu tham khảo

Lý Thị Liên Khai, Nguyễn Thị Hạnh Chi và Nguyễn Thanh Lãm, 2015. Khảo sát tỷ lệ nhiễm và xác định gene kháng kháng sinh của Enterotoxigenic Escherichia colitrên heo con tiêu chảy tại tỉnh Vĩnh Long và Đồng Tháp.Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản và Công nghệ Sinh học. 39: 7-17.

Lâm Thị Thu Hương và Đường Chi Mai, 2011. Tỷ lệ nhiễm rotavirus và Escherichia coli k88 trên heo con tiêu chảy.Khoa học Kỹ thuật Thú y. 6: 31-35

Nguyễn Thị Hạnh Chi, Lý Thị Liên Khai, Hà Thanh Toàn, 2014. Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản và Công nghệ Sinh học. 33: 68-77.

Holland, R. E., 1990. Some infectious causes of diarrhea in young farm animals. Clinical microbiology reviews. 3(4): 345-375.

Morin, M., Turgeon, D., Jolette, J. et al., 1983. Neonatal diarrhea of pigs in Quebec: infectious causes of significant outbreaks. Canadian Journal of Comparative Medicine.47(1): 11-17.

Wieler, L., Ilieff, A., Herbst, W. et al., 2001. Prevalence of enteropathogens in suckling and weaned piglets with diarrhoea in southern Germany. Journal of Veterinary Medicine, Series B. 48(2): 151-159.

Katsuda, K., Kohmot,o M., Kawashima, K., and Tsunemitu, H., 2006. Frequency of enteropathogen detection in suckling and weaned pigs with diarrhea in Japan. Journal of veterinary diagnostic investigation. 18(4): 350-354.

Zhang, W., 2014. Progress and challenges in vaccine development against Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) associated porcine postweaning diarrhoea (PWD). Journal of Veterinary Medicine and Research. 1(2): 1006.

Dubreuil, J. D., Letellier, A., and Harel, J., A recombinant, 1996. Escherichia coliheat-stable enterotoxin b (STb) fusion protein eliciting neutralizing antibodies. FEMS Immunology & Medical Microbiology. 13(4): 317-323.

Da Hora, V. P., Conceição, F. R., Dellagostin, O. A. et al., 2011. Non-toxic derivatives of LT as potent adjuvants. Vaccine. 29(8): 1538-1544.

Gyles, C. L., Prescott, J. F., Songer, J. G., and Thoen, C. O., 2011, Pathogenesis of bacterial infections in animals: John Wiley & Sons, Forth Edition. Wiley-Blackwell, 664 pages.

Dubreuil, J. D., 2008. Escherichia coli STb toxin and colibacillosis: knowing is half the battle. FEMS microbiology letters, 278(2): 137-145.